噬菌體篩選的相關(guān)知識點介紹

將編碼多肽的外源DNA片段與噬菌體表面蛋白的編碼基因融合(插入信號肽與衣殼蛋白基因間)后，以融合蛋白的形式呈現(xiàn)在噬菌體的表面，每個噬菌體只含1個外源基因，被展示的多肽或蛋白可保持相對的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，展示在噬菌體的表面。導(dǎo)入了各種各樣外源基因的一群噬菌體，就構(gòu)成一個展示各種各樣外源肽的噬菌體展示庫。噬菌體篩選展示局限性：1、肽庫容量受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率影響，容量一般在109，高于此限制的較多基因?qū)㈦y以表達(dá)；2、編碼多肽的基因帶有一定的密碼子偏愛性，限制了肽庫的復(fù)雜度；3、噬...

單抗制備為什么免疫后沒有效價或免疫后效價低？

單抗制備會由于亞克隆細(xì)胞生長環(huán)境不合適，導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞增長到一定密度的時候，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；控制好細(xì)胞的密度，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。單抗制備為什么免疫后沒有效價或免疫后效價低？（1）設(shè)計的抗原與被免疫...

單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用案例

單克隆抗體制備是相對于多克隆抗體而言的。單克隆抗體指由單一的漿細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一抗原表位的抗體。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被抗原決定簇激活，增殖分化出大量的漿細(xì)胞，而后由漿細(xì)胞分泌出特異性抗體。1957年，生物學(xué)家伯內(nèi)特提出了克隆選擇學(xué)說：動物的每個B淋巴細(xì)胞都有其*的受體，在受到外界抗原刺激時，特定的B細(xì)胞會發(fā)生免疫反應(yīng)，迅速增殖分化產(chǎn)生相應(yīng)抗體，抵御抗原的入侵。隨后，人們發(fā)現(xiàn)無論是在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞還是移植到體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞都具有無限傳代的特點，1...

有助于提高蛋白表達(dá)目的的實驗方案

克隆基因在細(xì)胞中表達(dá)對理論研究和實驗應(yīng)用都具有重要的意義。通過表達(dá)能探索和研究基因的功能以及基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)理，同時克隆基因表達(dá)出所編碼的蛋白質(zhì)可供作結(jié)構(gòu)與功能的研究。大腸桿菌是目前應(yīng)用廣泛的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)的目的蛋白量甚至能超過細(xì)菌總蛋白量的80%。本實驗中，攜帶有目標(biāo)蛋白基因的質(zhì)粒在大腸桿菌BlL21中，在37℃，IPTG誘導(dǎo)下，超量表達(dá)攜帶有6個連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉(zhuǎn)移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基...

噬菌體篩選方法你知道嗎？

噬菌體篩選是一項高通量地淘選具有特定結(jié)合能力的多肽或抗體的分子生物學(xué)技術(shù)，也是目前抗體藥篩選過程中使用非常廣泛的一種技術(shù)平臺。噬菌體展示技術(shù)可對人和其他動物的B細(xì)胞抗體庫進(jìn)行體外建庫篩選，避開了免疫和細(xì)胞融合等步驟，從而縮短了實驗周期并降低了鼠源抗體的免疫原性。噬菌體篩選步驟：將經(jīng)過誘變和加熱處理的生產(chǎn)菌株孢子或細(xì)胞懸浮液0.5ml涂布到生產(chǎn)菌株的平板培養(yǎng)基上，表面干燥后加入0.1ml保存的噬菌體原液，涂布均勻后置適溫下培養(yǎng)48~72h，觀察噬菌斑的形成并計數(shù)（如無噬菌體原液...

抗CD44納米抗體制備與鑒定

急性髓系白血病（AML）是一種異質(zhì)性血液癌癥，目前主要的治療方法是化療和骨髓干細(xì)胞移植，但化療的特異性和配型的成功率均較低，因而患者的治愈者并不高。基于此，已有對于AML治療的新型小分子靶向藥物和免疫靶向藥物的研究，可通過靶向AML細(xì)胞提高患者的治愈者和整體生存率。研究表明，CD44在AML細(xì)胞表面高表達(dá)，且參與AML干細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展，并已有靶向AML細(xì)胞表面分子CD44的治療性抗體的研究。但是，傳統(tǒng)單克隆抗體制備過程繁瑣，且人源化過程復(fù)雜，故難以將理論研究轉(zhuǎn)化到實際應(yīng)用。...

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泰州醫(yī)博會展會進(jìn)行曲艾柏森攜手15000個人源/鼠源基因等產(chǎn)品亮相

2021年10月23日，為期三天的第十二屆中國（泰州）國際醫(yī)藥博覽會在泰州中國醫(yī)藥城會展交易中心開幕。來自美國、英國、法國和日本等16個國家和地區(qū)的700多家企業(yè)參加主題為：“聚焦產(chǎn)業(yè)前沿，推進(jìn)創(chuàng)新發(fā)展”的醫(yī)博盛會，本次醫(yī)博會共舉辦22個專題活動，創(chuàng)新建立線上+線下一體式同步會展模式，醫(yī)博會展區(qū)達(dá)4萬平米，分為國內(nèi)外zhiming醫(yī)藥企業(yè)展區(qū)、診斷試劑和醫(yī)療設(shè)備展區(qū)、中醫(yī)藥和大健康產(chǎn)業(yè)展區(qū)、藥品研究制造及制藥裝備展區(qū)四大展區(qū)。聚焦產(chǎn)業(yè)前沿大會共舉辦專題活動22個，包括開幕式、...