噬菌體篩選方法你知道嗎？

　　噬菌體篩選是一項(xiàng)高通量地淘選具有特定結(jié)合能力的多肽或抗體的分子生物學(xué)技術(shù)，也是目前抗體藥篩選過程中使用非常廣泛的一種技術(shù)平臺(tái)。噬菌體展示技術(shù)可對(duì)人和其他動(dòng)物的B細(xì)胞抗體庫進(jìn)行體外建庫篩選，避開了免疫和細(xì)胞融合等步驟，從而縮短了實(shí)驗(yàn)周期并降低了鼠源抗體的免疫原性。

　　噬菌體篩選步驟：

　　將經(jīng)過誘變和加熱處理的生產(chǎn)菌株孢子或細(xì)胞懸浮液0.5ml涂布到生產(chǎn)菌株的平板培養(yǎng)基上，表面干燥后加入0.1ml保存的噬菌體原液，涂布均勻后置適溫下培養(yǎng)48~72h，觀察噬菌斑的形成并計(jì)數(shù)（如無噬菌體原液，也可用噬菌斑制成懸浮液）。將未經(jīng)誘變但經(jīng)加熱處理的生產(chǎn)菌株孢子或細(xì)胞懸浮液按上述步驟操作，觀察噬菌斑的形成并計(jì)數(shù)。將未經(jīng)誘變和加熱處理的生產(chǎn)菌株孢子或細(xì)胞懸浮液按上述步驟操作，觀察噬菌斑的形成并計(jì)數(shù)。

　　比較三者計(jì)數(shù)結(jié)果，確定噬菌體的加熱死亡率和誘變后的抗性率。鹽酸羥胺的后續(xù)處理鹽酸羥胺有促進(jìn)溶原性噬菌體釋放的作用，因此可在以上育種步驟中增加鹽酸羥胺后續(xù)處理一步。將以上噬菌體抗性檢測(cè)活性高的抗性懸浮液分離到含鹽酸羥膠0.5%~5%的生產(chǎn)菌株平板分離培養(yǎng)基上，在適溫下培養(yǎng)48~96h至生成單菌落。

　　將分離的單菌落制成細(xì)胞懸浮液，60~80℃下處理5~15min，在不含鹽酸羥胺的生產(chǎn)菌株平板分離培養(yǎng)基上進(jìn)行二次分離。將二次分離得到的單菌落接種斜面，進(jìn)行生產(chǎn)能力和抗性檢測(cè)。高產(chǎn)抗噬菌體菌株的的篩選按常規(guī)方法對(duì)抗性菌株進(jìn)行搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)或其他方法生產(chǎn)能力檢測(cè)，篩選高產(chǎn)菌株。