雜交瘤細(xì)胞系

雙特異性抗體（bispecificantibody,BsAb）,擁有兩個不同的抗原結(jié)合位點，從而同時與兩個靶抗原結(jié)合，在發(fā)揮抗體靶向性的同時，介導(dǎo)另外一種特殊的功能，例如一個結(jié)合靶細(xì)胞上的特異抗原，另一個結(jié)合淋巴細(xì)胞或者吞噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞，從而在腫瘤診斷及治療過程中發(fā)揮傳統(tǒng)抗體*的優(yōu)勢。雙特異性抗體是一種工程化的抗體類蛋白產(chǎn)物，在自然情況下是不會產(chǎn)生的，只能通過化學(xué)或者生物學(xué)的方法來制備，利用DNA重組及細(xì)胞融合的技術(shù)來實現(xiàn)。通過雜交瘤細(xì)胞系來制備雙特異性抗體是早使用的一種方法，在目前也常用來制備單克隆抗體藥物開發(fā)。但是這種技術(shù)有天然的缺陷，由于重鏈和輕鏈的隨機重組，兩種針對不同抗原的抗體重組有以下10種形式，但只有一種是需要的。

艾柏森生物提供雙特異性抗體定制服務(wù)，可以滿足客戶不同的需求。

技術(shù)流程

1.　選擇標(biāo)記物的引入：雜交瘤細(xì)胞系需要引入突變以便篩選。HAT敏感的雜交瘤細(xì)胞能在含有8-氮鳥嘌呤藥物的培養(yǎng)基中存活。

2.　流式細(xì)胞儀篩選雜交瘤細(xì)胞

3.　細(xì)胞融合：使用聚乙二醇或者電誘導(dǎo)細(xì)胞融合。

4.　從雜交瘤培養(yǎng)液中篩選特異性抗體：ELISA，流式細(xì)胞儀和細(xì)胞毒性是常用的篩選方法

5.　克?。汉Y選穩(wěn)定分泌bsAb的細(xì)胞系，再進(jìn)行單克隆細(xì)胞培養(yǎng)，常用的方法為有限稀釋法。

6.　雙特異性抗體的純化：通常使用蛋白A或蛋白G親和色譜法與離子交換色譜或排阻色譜合并來純化雙特異性抗體，bsAb的純度可以通過SDS-PAGE，等電聚焦，Western-blot，同型特異性的ELISA來評估。