Northern Blot實驗外包

或稱RNA印跡，是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達(dá)的分子生物學(xué)操作。通過檢測細(xì)胞分化過程中或細(xì)胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達(dá)情況可觀察到細(xì)胞調(diào)控或了解細(xì)胞功能等。

Northern blotting技術(shù)流程包括采用電泳分離RNA，隨后通過與目的RNA互補的雜交探針進(jìn)行對目的RNA的檢測。由于核算帶負(fù)電荷，因此帶有正電荷的聚酰胺膜有較高的膜轉(zhuǎn)移效率。并且轉(zhuǎn)移緩沖液常含有甲酰胺，其可降低探針和RNA結(jié)合所需溫度，因此可降低RNA在高溫下變性的風(fēng)險。RNA轉(zhuǎn)移到膜后，通過UV或加熱可與膜進(jìn)行共價結(jié)合。隨后加入已標(biāo)記的探針進(jìn)行探針和目的RNA的片段的雜交，并進(jìn)行膜的洗滌以洗去未特異性結(jié)合的探針已消除背景。后，雜交信號可被X-ray檢測并且進(jìn)行定量。

操作流程大致如下：

1.        RNA的提取

2.        電泳

3.        將RNA從變性膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜

4.        UV或熱固定法將RNA固定到膜上

5.        探針標(biāo)記

6.        雜交，洗膜

7.        圖像分析