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技術服務|哺乳動物細胞蛋白表達系統

更新時間:2021-10-27點擊次數:1129

哺乳動物細胞表達系統的優勢

1. 能實現翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性;

2. 表達水平高;

3. 高效啟動子控制蛋白表達

4. 適合大規模蛋白表達。

艾伯森生物哺乳表達系統

艾伯森生物提供表達載體構建、瞬時轉染、表達測試及大規模動物細胞發酵和蛋白純化等一站式蛋白技術服務。


表達載體:pcDNA 3.1,pIRES,pTT3,pCEP4,pATX1等常規載體以及我司分子技術人員自行合成與后期改造的zhaunli性載體。

艾伯森生物哺乳表達系統服務內容

1. 載體構建及改進

 1) 可將cDNA克隆至客戶或艾伯森生物提供的哺乳細胞的表達載體中;

 2) 可在表達載體中添加分泌信號肽和純化標簽,促進蛋白分泌表達及滿足一步親和純化的需求;

 3) 能生產并鑒定高效穩定細胞系,適合大規模發酵生產。

2. 穩定基因表達符合長期生存需求。整個實驗操作流程提供長期穩定及規模可調的蛋白生產

3. 瞬時表達(TGE)

 1) 與穩定基因表達相比,TGE主要適用于短期內制備重組蛋白,一般在10天內即可快速轉染,無需質粒DNA的遺傳性選擇

 2) 艾柏森生物的瞬時表達使用懸浮細胞,能夠完成體積到100L的蛋白表達。

4. 工藝過程開發及擴大規模。艾柏森生物能夠優化表達過程以及表達產物,檢測細胞表達量,摸索發酵罐發酵條件,適合大規模發酵生產。

5. 純化。艾伯森生物擁有完整的蛋白純化系統,親和純化,凝膠過濾,離子交換及疏水層析等純化方法,能夠完成帶標簽與不帶標簽蛋白的純化,以及純化工藝的摸索。

服務流程

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells


哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

經典案例

某生物細胞器基質蛋白,全長334aa,大小37.03kDa,自帶Fc標簽蛋白,采用293F細胞表達。我們在對其編碼基因進行全密碼子優化后,把它構建到pTT3載體上,測序驗證無誤后,進行了30ml體積試表達,如Figure1:

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.?. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的最大回收率,我們先后對Flowthrough進行了兩次Protein G純化(Figure2~Figure3),可以看到在第二次純化后,FT中尚殘留的目的蛋白。

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure2. Target protein purification profile.

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

為此我們提高了鹽濃度至300mMNaCl,這次洗脫后,FT中剩余的蛋白量顯著降低,如Figure4.

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表達摸索清楚成熟的實驗條件后,我們進入大體積制備,2L發酵。

哺乳動物細胞蛋白表達系統;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.


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