選擇合適的抗體，事半功倍

子曾經(jīng)曰過“知己知彼，百戰(zhàn)不殆"，很多科研工作者對實驗技能出神入化，但對所使用的試劑生產(chǎn)和應用知之甚少，導致買到不合適或jiamao偽劣的產(chǎn)品，對時間和經(jīng)費造成極大的損失浪費，所以選擇合適的抗體，事半功倍。

一.抗體種屬來源的選擇

有人認為單抗比多抗好，其實這并不是一個嚴謹?shù)挠^點，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優(yōu)于單抗，并且特異性并不一定就遜于單抗，主要看抗原的設計水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來源抗體較少。不建議糾結于單抗好還是多抗好，能做出實驗的抗體就是好抗體。

在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好，不宜同源。抗體不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標實驗中，需要在區(qū)別于實驗種屬的基礎上，區(qū)分開兩個指標的抗體種屬來源，以便于二抗區(qū)別識別。

二.關于特異性的選擇

特異性的選擇主要需要考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、標記物的特異性。

（1）蛋白特異性

針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個細節(jié)要區(qū)分，重組表達的蛋白和內源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不是全長表達，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內。內源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進行序列比對，并結合抗體免疫原序列，查看交叉反應的情況。磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜一概而論。

（2）種屬特異性

同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設計多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性情況與其他種屬發(fā)生交叉反應。需要參照說明書注明的可反應種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受理其關于質量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。

（3）實驗方法特異性

目前使用抗體的實驗方法有很多，不同的使用方法過程中，因為對蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應用方法進行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會將每個抗體都進行各種實驗的檢測，目前檢測比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對具體的實驗方法沒有找到合適的抗體的，可以結合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。

（4）標記物的特異性

一般基于實驗操作的實驗方法不會使用帶有標記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過二抗類的試劑標記達到結果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實驗，可能就會使用到直接標記的一抗，比如流式實驗。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不通的參數(shù)要求選擇對應的標記物。在免疫熒光雙標實驗中，需要選配不同的熒光標記物。

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